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紫外光吸收法測(cè)定蛋白濃度過(guò)程
日期:2025-04-19 00:54
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摘要:紫外光吸收法測(cè)定蛋白濃度過(guò)程: 1.用品和儀器:紫外分光光度劑,微量自動(dòng)取液儀。 2.試劑:標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)重的純凈蛋白質(zhì),配成1mg/ml儲(chǔ)液置于4度中備用。 0.1mol/l磷酸緩沖液,PH7.4;0.1mol/l磷酸緩沖液,PH12.0。 3.試驗(yàn)程序: 1),在2個(gè)潔凈干凈的石英比色杯中(內(nèi)徑1cm)中加入蒸餾水或其他用于溶解標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)與待測(cè)樣品的緩沖液,其中一個(gè)作為參比杯(在以后測(cè)量不變),另一個(gè)作為樣品杯,放入分光光度劑的相應(yīng)位置。 2),記錄下空白杯在280260nm處的光吸收值,或?qū)χM(jìn)行250-350nm波長(zhǎng)范圍的基線掃描。 3),...
紫外光吸收法測(cè)定蛋白濃度過(guò)程:
1.用品和儀器:紫外分光光度劑,微量自動(dòng)取液儀。
2.試劑:標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)重的純凈蛋白質(zhì),配成1mg/ml儲(chǔ)液置于4度中備用。
0.1mol/l磷酸緩沖液,PH7.4;0.1mol/l磷酸緩沖液,PH12.0。
3.試驗(yàn)程序:
1),在2個(gè)潔凈干凈的石英比色杯中(內(nèi)徑1cm)中加入蒸餾水或其他用于溶解標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)與待測(cè)樣品的緩沖液,其中一個(gè)作為參比杯(在以后測(cè)量不變),另一個(gè)作為樣品杯,放入分光光度劑的相應(yīng)位置。
2),記錄下空白杯在280260nm處的光吸收值,或?qū)χM(jìn)行250-350nm波長(zhǎng)范圍的基線掃描。
3),移去樣品比色杯中的蒸餾水或是緩沖液,干燥比色杯(用濾紙吸取殘液)。
4),在樣品比色杯中加入待測(cè)樣品液,在實(shí)驗(yàn)中提取樣品30ul加入2970ul雙證水,混勻,樣品液事先通過(guò)離心或用0.2um孔徑的濾膜過(guò)濾。
5),重復(fù)2步驟
6),蛋白含量計(jì)算:蛋白濃度(mg/ml)=1。55A280—0.76A260。
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